小麥粉中硫脲的測(cè)定

BJS201602

1. 范圍

本方法規(guī)定了小麥粉中硫脲含量的液相色譜測(cè)定方法。

本方法適用于小麥粉中硫脲含量的測(cè)定。

1. 原理

試樣經(jīng)提取、過(guò)濾、濃縮后，采用配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器的液相色譜儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量；陽(yáng)性樣品需用質(zhì)譜法進(jìn)行定性確認(rèn)。

1. 試劑和材料

注：水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1 試劑

3.1.1乙腈（CH₃CN)：色譜純。

3.1.2乙醇（C₂H₅OH）：分析純。

3.1.3乙酸銨（CH₃COONH₄）：色譜純。

3.1.4甲酸（HCOOH）：色譜純。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)品

硫脲標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子式、相對(duì)分子量、CAS登錄號(hào)見(jiàn)表1，純度≥99%。

表1 硫脲標(biāo)準(zhǔn)樣品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量

3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.3.1硫脲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取硫脲標(biāo)準(zhǔn)樣品（3.2）0.1 g（至0.000 1 g），用水溶解，并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液濃度為1 mg/mL。貯存于4℃冰箱中，有效期3個(gè)月。

3.3.2硫脲標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別準(zhǔn)確吸取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.1），用水將其稀釋成硫脲含量分別為0.0 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。臨用時(shí)配制。

3.4乙酸銨水溶液（25 mmol/L，含0.15%甲酸）：稱取1.925 g乙酸銨（3.1.3），加水溶解，加1.5 mL甲酸（3.1.4），定容至1 000 mL，經(jīng)微孔濾膜（3.5）過(guò)濾，待用。

3.5微孔濾膜：0.45 µm，有機(jī)相。

1. 儀器和設(shè)備

4.1 液相色譜儀：配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。

4.2 超聲波清洗器。

4.3 渦旋混合儀。

4.4 分析天平：感量分別為0.01 g和0.000 1 g。

4.5 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

4.6 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8 000 r/min。

1. 分析步驟

5.1 試樣制備

準(zhǔn)確稱取2 g試樣（至0.01 g）于25 mL具塞刻度試管中，加入5 mL水渦旋混勻，超聲5 min，加入乙醇（3.1.2）20 mL，混勻，超聲20 min后，用乙醇定容至刻度，濾紙過(guò)濾（如樣品渾濁或過(guò)濾較慢時(shí)，8 000 r/min離心5 min），取上層清液10 mL，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用2 mL流動(dòng)相（5.2.2）溶液復(fù)溶，再經(jīng)微孔濾膜（3.5）過(guò)濾，濾液進(jìn)液相色譜儀分析。

5.2 儀器參考條件

5.2.1色譜柱：HILIC柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或性能相當(dāng)者。

5.2.2流動(dòng)相：乙腈（3.1.1）+水，（90+10，v/v）。

5.2.3流速：1.0 mL/min。

5.2.4柱溫：25℃。

5.2.5檢測(cè)波長(zhǎng)：246 nm。

5.2.6進(jìn)樣量：5 μL。

5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.2）分別按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的硫脲標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5.4 試樣溶液的測(cè)定

將試樣溶液（5.1）按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的樣品溶液硫脲的色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中硫脲的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。

硫脲的標(biāo)準(zhǔn)液相色譜圖參見(jiàn)附錄A的圖A.1。

5.5 定性確認(rèn)

如果試樣中的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品一致，則可初步確認(rèn)試樣中存在被測(cè)物質(zhì)硫脲，陽(yáng)性試樣需用質(zhì)譜法進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。

5.5.1 色譜條件

a）色譜柱：HILIC Silica色譜柱，100 mm×2.1 mm（i.d.），3 μm，或性能相當(dāng)者。

b）流動(dòng)相：流動(dòng)相A：乙腈（3.1.1），流動(dòng)相B：乙酸銨水溶液（3.4），梯度洗脫條件見(jiàn)表2。

表2梯度洗脫條件

c）流速：0.2 mL/min。

d）進(jìn)樣量：5 μL。

e）柱溫：25℃。

5.5.2 質(zhì)譜條件

a）電離方式：電噴霧正離子模式。

b）檢測(cè)方式：多反應(yīng)檢測(cè)（MRM）。

c）霧化氣壓力：275.8 kPa。

d）干燥氣溫度：340℃。

e）干燥氣流速：10 L/min。

f）定性離子對(duì)、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量見(jiàn)表3。

表3 硫脲的定性離子對(duì)、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量

* ：定量離子

5.5.3 定性判定

按照上述條件測(cè)定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果試樣中的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致（變化范圍在±2.5%之內(nèi)）；試樣中目標(biāo)化合物的兩個(gè)子離子的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度偏差不超過(guò)表4規(guī)定的范圍，則可判定為試樣中存在硫脲。

表4 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的zui大允許偏差

1. 結(jié)果計(jì)算

試樣中硫脲含量按式（1）計(jì)算：

…………………………………………（1）

式中：

X—試樣中硫脲的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中硫脲的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V₁—試樣提取過(guò)程中定容體積，單位為毫升（mL）；

V₂—試樣提取后取上清液體積，單位為毫升（mL）；

V₃—試樣濃縮后復(fù)溶體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）；

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

1. 精密度

在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

1. 其他

當(dāng)稱樣量為2.00 g時(shí)，本方法檢出限為2 mg/kg，定量限為5 mg/kg。

附錄A

硫脲的液相色譜圖

圖A.1硫脲的液相色譜圖